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飼料淀粉糊化度測定

文章來源:互聯網 作者: 更新時間:2013-07-12

  試劑:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  1. 聯甲苯胺(o-Toluidine)試劑:溶解1.5g硫脲于940ml冰醋酸,家60ml甲苯胺,存于有色玻璃瓶中。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  2. 乙酸鈉緩沖液:溶解4.1g無水乙酸鈉與1L蒸餾水,用乙酸調pH至4.5。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  3. 葡萄糖淀粉酶溶液:將2g根霉葡萄糖淀粉酶(目錄號No.A-7255,Sigma Chemical Co.供貨)分散于250ml乙酸緩沖液,用玻璃棉濾紙(Whaatman No.GF/A)迅速過濾,限2小時內使用。葡萄糖淀粉的特異活性是在pH4.5,溫度40℃下生成28.4umol葡萄糖/min/mg蛋白。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  操作規程:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  1. 制備淀粉部分糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的5ml蒸餾水中。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  2. 制備淀粉完全糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的3ml蒸餾水和1ml 1N NaOH中。5分鐘后加1ml 1N HCl。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  3. 葡萄糖淀粉酶水解和測定葡萄糖。每個離心管加250ml葡萄糖淀粉酶溶液,40℃保溫30min。加2ml 25%的三氯乙酸鈍化葡萄糖淀粉酶(并使該酶和其他蛋白沉淀),以16,000×g離心5min。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  4. 取0.5ml上清液于試管中,加入4.5ml聯甲苯胺(o-Toluidine)試劑,將試管置沸水中10min,用冷水冷卻,加5ml冰醋酸,測定在63.nm的吸收率。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  按下式計算淀粉糊化度:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  Y=100*(B-K)/ (A-K)kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  K=A*(C-B) / (A-2B+C)kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  其中,A=全糊化淀粉的吸收率;kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  B= 全糊化淀粉和經過30min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率;kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  C= 部分糊化淀粉和經過60 min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率;kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  K= 1%完整淀粉經過30min水解后的吸收率。這對每種淀粉或特定處理的淀粉是一個常數,常規分析中只需測=定一次。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  這規程也可用來計算總淀粉%;用葡萄糖溶液(720ug/ml)制定標準曲線。按前法第kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  2步和第3步驟處理樣品,根據標準曲線讀取葡萄糖濃度。按下式計算淀粉含量:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  淀粉總量%=葡萄糖*0.9*100/樣品重(干基)kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

  
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